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81e Congrès de l'ACFAS

Les marchés de quartier à Montréal : le défi de la mobilisation des citoyens et des acteurs autour des innovations socio-environnementales

Auteur : Sylvain A. Lefèvre
Colloque    647 - 6e colloque sur la participation des citoyens : penser les processus de participation

Depuis 2006, les initiatives de marchés de quartiers se sont multipliées à Montréal. Ces projets visent à favoriser l'accès de proximité à une saine alimentation dans les quartiers mal desservis au plan de l'offre alimentaire. Offrant une grande variété de légumes et de fruits frais durant la saison des récoltes québécoises, ils facilitent l'ancrage de saines habitudes alimentaires dans la durée et la fréquence, soutiennent l'agriculture locale et constituent un lieu de promotion et de vente des légumes, fruits frais et autres aliments sains produits au Québec. Ils s'inscrivent de plus dans des démarches de transformation des rapports des citoyens à leur milieu de vie. A l'occasion d'une recherche-action menée avec plusieurs marchés de quartier montréalais, cette communication évalue les défis de leur ancrage dans ces territoires, de la participation des habitants à l'insertion dans des réseaux d'acteurs locaux et municipaux. 

81e Congrès de l'ACFAS

L'Atelier Climat, dispositif français de démocratie participative mis en place dans le cadre du développement durable : une nouvelle impulsion de l'action citoyenne ?

Auteur : Estelle-Fleur GALATEAU
Colloque    647 - 6e colloque sur la participation des citoyens : penser les processus de participation

Le changement climatique est un enjeu mondial qui nécessite une coordination à tous les niveaux d'action, faisant émerger de nouvelles problématiques sur l'importance d'une implication effective des habitants qui ne seraient plus, dans leur action, dissociés des politiques et des savants. Nombre d'ateliers citoyens ou conférences citoyennes fleurissent en France en empruntant au principe d'informations et de délibération des citoyens . Mais quels sont les objectifs recherchés par les institutions via la mise en place de tels dispositifs participatifs ? L'étude de l'Atelier Climat, dispositif français de démocratie participative ayant pour objet la question environnementale, met en exergue la nécessité d'une validation citoyenne pour assurer la légitimité de l'action entreprise au niveau local. Ce processus peut être considéré comme une nouvelle forme d'impulsion de l'action citoyenne, dans la mesure où il permet d'aboutir à la création et à la réalisation de plans d'action spécifiques, afin d'ajuster les politiques publiques sur les questions environnementales.




81e Congrès de l'ACFAS

Participation décisionnelle et pouvoir citoyen

Auteur : Eugénie Dostie-goulet
Colloque    647 - 6e colloque sur la participation des citoyens : penser les processus de participation

Les citoyens peuvent participer de plusieurs façons à la démocratie, la plus fréquente étant la participation électorale. Depuis quelques années, on s'intéresse de plus en plus à un autre type de participation, la participation publique, initiée et encadrée par les décideurs, où le niveau d'influence des citoyens est variable. Caddy et Vergez (2002) font la distinction entre les processus informatif, de consultation, ou de participation au processus décisionnel : l'acteur a un rôle plutôt passif lorsqu'il est informé, il est davantage impliqué dans la décision lorsqu'il est consulté, et il ne possèderait un véritable pouvoir que lorsqu'il participe au processus décisionnel. Notre recherche pose la question de l'influence réelle des acteurs impliqués dans cette participation dite décisionnelle. Les mesures et procédures participatives ont peu fait l'objet d'une évaluation, alors que les chercheurs sont nombreux à questionner l'influence effective qui en ressort (Caddy et Vergez 2002; Lacroix 2012; Thibault, Lequin et Tremblay 2000). Notre objectif est ainsi de mieux cerner le pouvoir réel des acteurs dans le cadre d'instances décisionnelles participatives.Cette communication présente les premiers résultats de notre recherche, issus d'une phase exploratoire où nous avons observé le fonctionnement participatif de six instances décisionnelles, dont deux commissions scolaires.




81e Congrès de l'ACFAS

Favoriser la participation en assemblée générale en répondant aux besoins des membres

Auteur : Marine Sériès
Colloque    647 - 6e colloque sur la participation des citoyens : penser les processus de participation

Traditionnellement dans les organismes communautaires au Québec, l'assemblée générale prend une signification qui dépasse son mandat de redditions de comptes pour également prétendre à être un lieu où les membres peuvent exercer une participation active. Dans la réalité, on observe toutefois que les membres sont difficiles à mobiliser et que, lorsqu'ils sont présents, ils participent peu aux délibérations et aux prises de décision. Notre intérêt s'est porté sur les pratiques favorisant la participation active des membres en assemblée générale, c'est-à-dire leur donnant la possibilité de prendre la parole et de participer aux décisions. Nous avons étudié la question sous l'angle des besoins psychosociaux des participants identifiés à partir de la classification de Glasser (1983) : le plaisir, l'appartenance, la liberté et le pouvoir. Cinq éléments sont finalement mis en relief pour soutenir la participation en assemblée générale : l'établissement d'un climat convivial, le soutien à la compréhension du contenu, le soutien à la prise de parole, la création d'espaces de prise de décision et la collaboration avec les différents acteurs concernés dans la mise en place de pratiques visant la participation active.

81e Congrès de l'ACFAS

Étude spectroscopique de l'interaction entre le peptide antimicrobien thanatin et des membranes lipidiques modèles

Auteur : Émile Robert
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

L'intérêt porté à l'étude des peptides antimicrobiens est nourri par la résistance croissante des bactéries face aux antibiotiques traditionnels, problème particulièrement présent en milieu hospitalier. Ici à l'Université Laval, plusieurs étudiants travaillent sur la synthèse et la caractérisation de tels peptides, le plus souvent d'origine artificielle. Ayant en vue d'approfondir l'expertise du département dans ce domaine, notre attention s'est arrêtée sur la thanatin. Ce peptide naturel, présent chez la punaise Podisus Maculiventris, se démarque par sa structure secondaire en forme d'«épingle à cheveux» stabilisée par un pont disulfure. On connait déjà son activité contre plusieurs bactéries à Gram positif et négatif ainsi que certains fungi, en plus de présenter une faible cytotoxicité. L'objectif du projet est d'étudier l'interaction de la thanatin avec des membranes lipidiques modélisant les cellules eucaryotes et procaryotes afin d'en déduire le mécanisme d'action. La spectroscopie infrarouge nous permet d'observer la structure secondaire du peptide en présence des membranes lipidiques ainsi que son effet sur la température de transition de phase des lipides. L'interaction entre la thanatin et la tête polaire des phospholipides est étudiée par résonnance magnétique nucléaire en phase solide du phosphore. Plusieurs autres techniques telles que la spectroscopie de fluorescence et le dichroïsme circulaire viendront appuyer notre analyse.

81e Congrès de l'ACFAS

Mot de clôture

Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides
81e Congrès de l'ACFAS

Analyse des peptides par spectrométrie de masse sur la plateforme protéomique du Centre génomique de Québec

Auteur : Sylvie Bourassa
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

La plateforme de protéomique du Centre de Génomique de Québec vise à rendre la protéomique et l'analyse des peptides accessibles à l'ensemble de la communauté scientifique par le biais de prestations de service ou de collaborations.  Au centre des activités de la plateforme se trouve la spectrométrie de masse, un puissant outil permettant non seulement l'analyse et la séquence des peptides mais aussi l'identification des protéines, la détermination de leur modifications post-traductionnelles et leur quantification. 

Les spectromètres de masse de type MALDI et ES permettent d'obtenir des informations spécifiques et complémentaires sur la masse et la séquence des peptides. Selon le type d'analyse à effectuer et la complexité de l'échantillon, des systèmes de chromatographie capillaire en phase réverse peuvent être utilisés pour la séparation des peptides avant l'analyse par spectrométrie de masse.

Diverses techniques de quantification relative ou absolue sont utilisées pour quantifier les peptides, telles que les techniques iTRAQ (isobaric Tag for Relative and Absolute Quantitation), SILAC (Stable Isotope Labeling of amino acids in cell culture) et MRM (Multiple Reaction Monitoring).

Des exemples de diverses applications seront présentés. 

81e Congrès de l'ACFAS

Interactions entre un peptide de β-lactoglobuline bovine (b-lg f1-8) et les protéines du lactosérum : le cas de l'α-lactalbumine

Auteur : Gabriel Ratté
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

Des travaux antérieurs sur le fractionnement d'hydrolysats enzymatiques de protéines du lactosérum ont permis d'isoler un peptide de β-lactoglobuline (b-lg f1-8) possédant une capacité d'auto-assemblage, menant à la formation de nanofibres et d'hydrogels. Des observations préliminaires ont montré que l'auto-assemblage du peptide b-lg f1-8 modifiait la composition de mélanges de protéines de lactosérum, notamment en diminuant la concentration en α-lactalbumine (α-la) soluble. La présente étude avait pour but de démontrer l'occurrence d'interactions entre le peptide b-lg f1-8 et l'α-la. L'auto-assemblage du peptide b-lg f1-8 a été étudié en présence d'α-la à 25 et 55oC. Il a été observé que l'ajout d'α-la (1 % p/v) à un hydrolysat trypsique de protéines de lactosérum (10% p/v) permettait de retarder le processus de floculation du peptide b-lg f1-8. Cependant, ce phénomène a été observé uniquement à 55oC. La caractérisation du profil de dénaturation thermique de l'α-la par calorimétrie différentielle à balayage (DSC) a démontré que la présence du peptide b-lg f1-8 induisait une diminution de l'enthalpie de dénaturation de la protéine variant entre 25 et 50 % selon le pH. Ces observations suggèrent que le peptide b-lg f1-8 interagit avec l'α-la par le biais d'interactions hydrophobes. Nos travaux confirment que le phénomène d'auto-assemblage du peptide b-lg f1-8 peut être mis à profit dans le développement d'approches de fractionnement de mélanges protéiques.

81e Congrès de l'ACFAS

Utilisation de résidus photosensibles pour le décodage de chimiothèques de peptides cycliques

Auteur : Simon Vézina
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

Les peptides cycliques sont des outils d'intérêt et d'une grande utilité en chimie biologique et médicinale pour étudier et moduler les interactions protéine-protéine. En comparaison avec les peptides linéaires, ces macrocycles sont résistants aux protéases et leur rigidité conformationelle réduit le coût entropique de liaison face aux macromolécules biologiques. L'énorme diversité moléculaire qui est accessible avec les peptides cycliques a propulsé leur utilisation en chimie combinatoire. L'approche «one-bead-one-compound» (OBOC) est une méthode de criblage à haut débit très performante dans laquelle des microbilles de polymère exposent individuellement plusieurs copies d'un composé unique, c'est-à-dire un seul composé par bille. Cette méthode a été largement utilisée pour identifier des ligands pour une grande variété de protéines. Par contre, l'utilisation des peptides cycliques dans l'approche OBOC est limitée par les difficultés à séquencer les composés retenus après le criblage. En effet, l'absence d'amine libre en N-terminal rend la dégradation d'Edman impossible et le patron de fragmentation en spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) trop complexe pour élucider la structure. Notre approche est d'incorporer un résidu photosensible au sein du macrocycle et comme ancrage afin de linéariser suite à la réouverture du cycle et de cliver les peptides du support simultanément. Les candidats linéarisés ainsi retenus peuvent être séquencés par MS/MS.

81e Congrès de l'ACFAS

Étude structure-activité sur un peptide antimicrobien modèle

Auteur : Pierre-alexandre Paquet-côté
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

Lors des dernières années, il y a eu une importante augmentation des bactéries résistantes aux antibiotiques ainsi qu'une diminution du nombre de nouveaux antimicrobiens. Il faut donc développer de nouveaux agents antimicrobiens ayant un mode d'action diminuant le risque de développement d'une résistance. L'une des familles ayant un tel potentiel est celle des peptides cationiques amphiphiles, car ils possèdent un mode d'action visant la perturbation des membranes cellulaires. Pour étudier les facteurs agissant sur l'activité biologique des peptides antimicrobiens, la synthèse d'analogues d'un composé-modèle 1 fut réalisée par synthèse en parallèle sur support solide. Ces analogues ont une ou deux leucines substituées par des acides aminés cationiques (Arg, Lys, His). Nous présenterons aussi la caractérisation de ces analogues par des études biophysiques et par des études d'activités biologiques, soit des tests d'activité antimicrobienne et d'activité hémolytique.

 

H-Leu-EC-Leu-Leu-Leu-EC-Leu-Leu-EC-Leu-Leu-Leu-EC-Leu-OH   1

EC = (21-couronne-7)-L-Phénylalanine

81e Congrès de l'ACFAS

Les peptides antimicrobiens d'origine marine : un mécanisme de défense applicable en santé publique

Auteur : Lucie Beaulieu
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

Les océans forment un vaste réservoir de biodiversité qui reste encore largement inexploré. Les ressources marines d'eaux froides du Québec, incluant les coproduits de la pêche et de l'exploitation aquacole, ainsi que les espèces émergentes, recèlent une foule de biomolécules actives potentielles. Parmi ces molécules, les peptides antimicrobiens font l'objet de recherches visant leur application en industrie agro-alimentaire, en médecine vétérinaire et humaine.

Les peptides antimicrobiens sont des composantes importantes du système immunitaire chez une variété d'organismes incluant les vertébrés et les invertébrés. Bien que les peptides antimicrobiens soient grandement étudiés, seulement quelques-uns ont été isolés et caractérisés à partir des ressources marines québécoises. Ils peuvent être des peptides natifs ou dérivés de l'hydrolyse de protéines. Ainsi, nos travaux de recherche des dernières années ont permis de produire des fractions peptidiques à partir des bioressources marines et de mettre en évidence des activités antibactériennes chez des crustacés, poissons et plus récemment chez les macroalgues. Ces recherches mettent l'accent sur le criblage et la caractérisation de biomolécules actives offrant ainsi un éventail d'applications en perspective.

81e Congrès de l'ACFAS

Développement de chélateurs bi-fonctionnels pour le marquage de peptides avec le 64Cu et d'autres radio-métaux utilisés en TEP

Auteur : Céline Denis
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

Le 64Cu (T1/2= 12.7h) est un radionucléide d'intérêt pour l'imagerie TEP bien que son utilisation  est actuellement limitée par la disponibilité de chélateurs bifonctionnels (CBF) offrant une résistance élevée aux réactions de transmétallation in vivo. La nature et la grosseur des CBF ont un impact sur les propriétés biologiques des radiotraceurs peptidiques. Pour moduler ces propriétés, nous avons développé une série de chélates tétradentates acycliques très compacts dérivés de l'histidine et de l'acide glutamique. Dans le cadre de cet exposé, nous présenterons la synthèse de ces nouveaux CBF ainsi que leur stabilité de complexation in vivo avec le 64Cu et différents radiométaux utilisés en TEP.

81e Congrès de l'ACFAS

Les peptides radiomarqués pour détecter les cancers du sein et de la prostate par imagerie TEP

Auteur : Brigitte Guérin
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

La tomographie par émission de positrons (TEP) est l'une des techniques d'imagerie médicale les plus performantes disponibles actuellement. Son développement est lié à celui de molécules marquées par un atome émetteur de positrons (β+). Parmi ceux-ci, le gallium-68 et le cuivre-64 sont des radionucléides de choix en raison de leur durée de vie relativement courte, 68 min et 12,7 h respectivement. Les récepteurs peptidiques surexprimés à la surface des cellules cancéreuses présentent des cibles d'intérêt pour le développement de nouveaux radiotraceurs peptidiques plus spécifiques pour la TEP, ouvrant la voie à une imagerie moléculaire.

Le but de cette étude est de comparer différents peptides marqués au 64Cu et au 68Ga afin d'identifier le candidat le plus prometteur pour les études cliniques. Plusieurs peptides ont présentés d'excellentes affinités pour leurs récepteurs respectifs lors d'études de compétition sur des cellules humaines de cancer du sein (MCF7, T47D) et de la prostate (PC3, LnCap). Cependant, le 64Cu- et 68Ga-NOTA-PEG-BBN, ciblant les récepteurs du peptide de la relâche de la gastrine (GRPR) et présentant d'excellente stabilité in vivo, ont permis le meilleur ciblage de la tumeur et des organes cibles (pancréas, surénales) sur des modèles de xénogreffes chez la souris. Ces traceurs sont des candidats prometteurs pour l'imagerie TEP des tumeurs du sein et de la prostate exprimant les GRPR.

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Homogénéité de l'orientation moléculaire de la soie

Auteur : Alexandrine Huot
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

La soie est constituée de protéines fibreuses et est produite principalement par les arthropodes, notamment les araignées et les insectes. Ce biomatériau attire l'intérêt de la communauté scientifique depuis plusieurs années en raison de sa biocompatibilité et de ses excellentes propriétés mécaniques. Ces dernières résultent en partie du niveau élevé d'orientation des protéines parallèlement à l'axe de la fibre. Toutefois, le niveau des propriétés mécaniques pourrait être limité si l'orientation moléculaire n'était pas homogène le long d'une fibre. Par exemple, le ver à soie domestique Bombyx mori construit son cocon en exécutant une figure de huit avec sa tête. Ceci suggère que la vitesse de filage pourrait ne pas être identique en tout point et que l'orientation moléculaire pourrait varier faiblement le long de la fibre. Pour détecter de si petites variations, la spectromicroscopie Raman en lumière polarisée est particulièrement adaptée, car c'est la seule technique permettant un échantillonnage direct le long d'une figure de huit ou d'un segment de fibre. À des fins de comparaison, des fibres de B. mori dégommées obtenues à partir du cocon déroulé ou par filage forcé ont également été étudiées. Enfin, les résultats obtenus pour le B. mori ont été comparés avec de la soie d'araignée obtenue par filage forcé qui devrait être être plus homogène. Pour atteindre ces objectifs, différentes méthodes de caractérisation de l'orientation moléculaire ont été comparées.

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Études spectroscopiques de la structure et de l'interaction membranaire de la recoverine

Auteur : Kim Potvin-Fournier
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

La recoverine est une protéine périphérique des bâtonnets rétiniens servant à la transduction et est membre de la famille des neuroprotéines sensibles au calcium (NCS). Les NCS possèdent un groupement myristoyle et elles sont connues pour changer de conformation selon la concentration en calcium, ce phénomène s'appellant Calcium Myristoyl Switch. D'autre part, les membranes cellulaires des bâtonnets rétiniens bovins possèdent beaucoup plus de lipides insaturés que les autres membranes, soit plus que 60%. L'étude de la liaison réversible entre la recoverine myristoylée ou non et les différents phospholipides des membranes permettra de déterminer si la recoverine s'insère ou non dans la membrane. Des études en spectroscopie infrarouge et en résonance magnétique nucléaire des solides en phosphore-31 furent effectuées. Les phospholipides utilisés furent de différentes longueurs de chaînes acyle et de différentes têtes polaires. L'effet de l'insertion de 10% molaire de cholestérol fut aussi étudié. Les résultats obtenus démontrent que la protéine s'agrège en absence de calcium et dans sa forme non myristoylée et ce, principalement dans les lipides saturés. Néanmoins, le Calcium Myristoyl Switch fut démontré en présence de lipides insaturés avec des têtes phosphatidylcholine. Les travaux futurs impliqueront entre autres des études en RMN 2H sur le spectromètre RMN des solides 900 MHz du Centre RMN à ultrahaut champ pour les solides à Ottawa.

81e Congrès de l'ACFAS

Caractérisation biologique et biophysique des interactions entre la sécrétine et les glycosaminoglycanes sulfatés

Auteur : Phuong Nguyen
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

La sécrétine, un peptide de 27 résidus, exerce une grande diversité de fonctions physiologiques par le biais de son interaction spécifique avec le récepteur membranaire SCTR, un récepteur couplé aux protéines G de la classe B. De par sa nature flexible et cationique, la sécrétine pourrait également se lier électrostatiquement de façon transitoire aux anions situés à la surface de la membrane plasmique, tels que les glycosaminoglycanes (GAGs). Les GAGs constituent de larges polysaccharides linéaires abondants à la surface des cellules eucaryotes et sont reconnus en tant que corécepteur des cytokines. Dans ce contexte, nous avons initialement caractérisé la cinétique et la thermodynamique de la liaison de la sécrétine aux GAGs sulfatés en combinant différentes approches, telles que la chromatographie d'affinité, la titration calorimétrique isotherme et la résonance plasmonique de surface. Par dichroïsme circulaire, nous avons observé que l'interaction entre la sécrétine et les GAGs stabilise la conformation hélicoïdale du peptide. D'autre part, en employant une lignée cellulaire déficiente au niveau de la biosynthèse des GAGs, il a été remarqué au moyen de la microscopie confocal et la cytométrie en flux que la présence de GAGs favorise l'adsorption de la sécrétine à la surface cellulaire. Notre étude suggère que les GAGs localisés à la membrane plasmique pourraient être impliqués dans la présentation de la sécrétine à son récepteur SCTR. 

81e Congrès de l'ACFAS

Design et optimisation de nouveaux inhibiteurs de la matriptase pour le traitement de l'influenza

Auteur : Eric Marsault
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

La matriptase est une protéase à sérine transmembranaire située sur la surface extracellulaire de nombreux tissus épithéliaux. Notre groupe a démontré que la matriptase est exprimée au niveau de l'épithélium pulmonaire humain, et qu'elle est compétente pour cliver l'hémaglutinine du virus de l'influenza H1N1. Cette première étape est indispensable pour permettre au virus d'infecter l'hôte, et dépend de protéases de l'hôte car le virus n'est pas compétent pour faire sa propre activation.

Nous avons conçu une nouvelle série de petits inhibiteurs peptidomimétiques de la matriptase, composés d'une séquence de reconnaissance et d'un piège à sérine. Ces inhibiteurs, qui sont actifs dans le sous-nM, sont sélectifs pour la matriptase. De plus, ils ont démontré leur capacité à inhiber la réplication du virus dans cellules d'épithélium pulmonaire humaines. Le design, la synthèse, les relation structure-activité ainsi qu'un modèle de docking de l'inhibiteur dans le site actif de la matriptase seront présentées.

81e Congrès de l'ACFAS

Études spectroscopiques de la structure et de l'interaction membranaire de la région NAC de l'α-synucléine

Auteur : Laurie Bédard
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

La maladie de Parkinson est une maladie neurodégénérative touchant environ 100 000 personnes au Canada, dont 25 000 au Québec. Les symptômes tels que les tremblements au repos, la rigidité, les problèmes d'équilibre, l'akinésie et la bradykinésie, proviennent de la baisse drastique de la dopamine. Présentement, les médicaments prescrits pour la maladie ne font que réduire ces symptômes, mais aucun ne ralentit la progression ou ne l'arrête. Plusieurs études ont démontré la présence d'agrégats dans les tissus nerveux, plus spécifiquement dans les terminaisons présynaptiques. Ces agrégats entraînent la dégénérescence des tissus. Ils sont composés d'une protéine amyloïde appelée α-synucléine qui, selon les conditions, adopte des structures riches en feuillets β, en protofibrilles et en fibrilles. Elle comporte 140 acides aminés, dont une partie centrale hydrophobe. Cette section joue un rôle crucial dans l'agrégation puisqu'il a été démontré que les acides aminés 71 à 82 sont essentiels pour la formation des fibrilles. Nous tentons de mieux comprendre son interaction avec les lipides par RMN à l'état solide du 31P et du 2H ainsi que par infrarouge à transformée de Fourier et, la structure du peptide par microscopie électronique, dichroïsme circulaire et infrarouge à transformée de Fourier.

81e Congrès de l'ACFAS

Islet amyloid polypeptide : mécanismes d'agrégation et stratégies pour moduler l'amyloïdogenèse et la protéotoxicité

Auteur : Steve Bourgault
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

L'agrégation des polypeptides sous forme de fibres amyloïdes et/ou d'inclusions cellulaires est intrinsèquement associée à plusieurs maladies, telles que la maladie d'Alzheimer, le diabète de type II ou la maladie de Parkinson. De nombreuses études ont démontré un lien direct entre le processus amyloïdogénique et la dégénérescence du tissu où s'accumulent les fibres amyloïdes. Néanmoins, plusieurs interrogations persistent quant aux mécanismes (bio)chimiques communs à la base de ces maladies. Notamment, le rôle joué par le microenvironnement et les interactions transitoires avec diverses biomolécules dans la formation des fibres amyloïdes n'est toujours pas bien compris. Notre thématique de recherche s'inscrit dans ce contexte et cible la compréhension des mécanismes biochimiques à la base de l'amyloïdogenèse et de la protéotoxicité de l'hormone peptidique islet amyloid polypeptide (IAPP), dont l'agrégation au niveau des îlots de Langerhans chez les patients diabétique s est associée à la dégénérescence des cellules b-pancréatiques. Nous étudions l'effet des métabolites réactifs générés lors du stress oxydatif sur l'amyloïdogenèse de l'IAPP ainsi que l'implication des glycosaminoglycanes dans l'agrégation et l'action cytotoxique de l'IAPP. De même, nous développons des approches chimiques et des dérivés de synthèse afin de moduler l'agrégation de ce peptide fortement amyloïdogénique et ainsi réduire sa pathogénicité.

81e Congrès de l'ACFAS

Dîner

Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides
81e Congrès de l'ACFAS

Modulation de l'agrégation et de la toxicité de l'islet amyloid polypeptide par des composés polyalcool et polyacide

Auteur : Carole Anne De Carufel
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

Chez les patients diabétiques de type-II, des fibres amyloïdes sont observées au niveau des îlots de Langerhans. Ces fibres sont principalement composées de l'islet amyloid polypeptide (IAPP), une hormone peptidique de 37 résidus cosécrétée avec l'insuline par les cellules bêta-pancréatiques. Nous avons récemment observé que les glycosaminoglycanes sulfatés accélèrent la formation des fibres amyloïdes et inhibent la cytotoxicité associée à l'agrégation de l'IAPP. Ces effets reposent principalement sur des interactions électrostatiques entre les résidus basiques du peptide et les groupements anioniques du polysaccharide. En considérant ce mécanisme d'action, nous avons développé des composés polyalcool et polyacide afin de, d'une part, moduler l'agrégation de l'IAPP, et, d'autre part, de réduire sa cytotoxicité. Une librairie de polyols et polyacides a été synthétisée et les composés ont été initialement caractérisés pour leur capacité à modifier la cinétique de fibrillogenèse de l'IAPP mesurée à l'aide de la thioflavine T. Nos résultats montrent que certains dérivés stimulent la formation de fibres amyloïdes et ce, de façon concentration-dépendante. En employant des cellules INS-1E b-pancréatiques, nous avons également observé que certains composés polyacides inhibent complètement la toxicité induite par l'IAPP. Cette étude suggère que des composés polyalcool et polyacide pourraient conduire au développement d'une nouvelle classe d'agents anti-amyloïdogéniques.

81e Congrès de l'ACFAS

Stabilisation et détermination de la structure du domaine C-terminal recombinant de la protéine MaSp1 du fil de trame de Nephila clavipes

Auteur : Martin Gauthier
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

Aussi simple qu'elle puisse paraître, la soie d'araignée renferme toujours un secret investigué par la communauté scientifique. Comment ce matériau si robuste peut-il passer d'un état soluble hautement concentré à la fibre connue de tous? Le domaine C-terminal de MaSp1, la protéine majeure du fil de trame de l'araignée, semble jouer un rôle clé dans le contrôle de la solubilité de la protéine et l'alignement des fibres de soie. La formation de ces fibres est initiée par des perturbations physicochimiques, telles que des changements de pH, des variations de force ionique et des forces de cisaillement croissantes, toutes rencontrées dans les conduits de la glande ampullacée majeure. Nous avons établi un protocole de purification du segment C-terminal recombinant de la protéine MaSp1 de Nephila Clavipes qui limite son agrégation. Nous avons également étudié sa structure et son niveau d'oligomérisation dans différentes conditions par résonance magnétique nucléaire (RMN), dichroïsme circulaire (DC), diffusion dynamique de la lumière (DLS), microscopie électronique à transmission (TEM), et spectroscopie de fluorescence. Toutes ces techniques ont permis de mettre en évidence un état conformationnel distinct, dit globule fondu, qui pourrait éclairer les processus moléculaires par lesquels le domaine C-terminal remplit ses fonctions précises. D'autres expériences avec la protéine doublement marquée au 13C/15N mèneront à la détermination complète de sa structure. 

81e Congrès de l'ACFAS

Développement de peptides inhibiteurs de l'activation du système du complément

Auteur : Renée Bazin
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

Le système immunitaire est constitué de différents éléments cellulaires et moléculaires qui travaillent de concert afin d'assurer à l'organisme une protection contre les agents pathogènes. Parmi ces éléments figure le système du complément, qui est composé d'une trentaine de protéines dont certaines servent à réguler l'activité globale du système afin d'éviter des réactions auto-immunes. Il arrive cependant que le système échappe à ce contrôle et participe au développement et à la pathologie de certaines maladies auto-immunes. Les étapes menant à l'activation du complément ont donc fait l'objet d'études visant à identifier des inhibiteurs qui pourraient être utilisés à des fins thérapeutiques. À Héma-Québec, nous étudions depuis plusieurs années les propriétés thérapeutiques de protéines purifiées à partir du plasma des donneurs de sang (IgIV). Les IgIV sont constituées d'immunoglobulines G polyclonales et possèdent des effets immunomodulateurs multiples, incluant la capacité d'inhiber l'activation du complément. Nous avons posé l'hypothèse qu'il serait possible de reproduire l'effet inhibiteur des IgIV à l'aide de courts peptides. C'est dans ce contexte que nous avons développé des peptides (9-mer) inhibiteurs du complément, en se basant sur l'interaction entre le C3b et la properdine, une étape centrale dans l'activation du système du complément. Les résultats obtenus et le potentiel thérapeutique des peptides isolés seront discutés dans le cadre de cette présentation. À venir...

81e Congrès de l'ACFAS

La technique de « Phage display » : recherche d'inhibiteurs peptidiques de l'enzyme aminoacyl-ARNt amidotransférase (AdT) de Helicobacter pylori

Auteur : Van Hau Pham
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

La recherche d'inhibiteurs de l'AdT de H. pylori, l'agent causal d'ulcères et du cancer de l'estomac, a été faite par la technique de « Phage display », permettant la sélection de peptides exprimés sur des protéines de capside des phages qui interagissent avec l'enzyme cible. Nous avons utilisé trois types de phages encodant des peptides linéaires de 7 et 12  acides aminés (aa) ou cycliques de C-7-C. Deux méthodes d'immobilisation de l'AdT ont été utilisées, soit sur une surface de polystyrène, soit en solution (système  biotine-streptavidine). Les phages encodant des peptides linéaires de 7 aa ne se sont pas liés avec l'AdT dans les deux méthodes d'immobilisation. Par contre, un peptide consensus de 12 aa, KVDEDSSLWHLH, trouvé par la méthode en solution, inhibe complètement l'activité de l'AdT à 5 mM. En immobilisant l'AdT sur la surface de polystyrène, les phages encodant des peptides de 12 aa ont révélé une séquence consensus, FHKYWWVPPASK. Par ailleurs, les phages encodant des peptides de C-7-C n'ont pas généré de séquences consensus; l'arrimage moléculaire de ces derniers a suggéré que le peptide CSAHNWPNC interagit avec Mg2+ de la sous-unité B de l'AdT. Ce peptide a été synthétisé, et est inhibiteur de l'AdT avec un Ki de 1,4 mM. Même si ces peptides sont de faibles inhibiteurs de l'AdT, ils pourraient être modifiés chimiquement pour améliorer leur capacité inhibitrice, et générer un « lead compound » pour le développement d'un nouvel antibiotique contre H. pylori.

81e Congrès de l'ACFAS

Études spectroscopiques du mécanisme d'action de nouveaux peptides amphiphiles cationiques dans des membranes modèles

Auteur : Michèle Auger
Colloque    648 - Nouvelles avancées en science des peptides

Une grande variété d'organismes produit des peptides antimicrobiens comme première ligne de défense. Ces peptides sont considérés comme une nouvelle génération potentielle d'antibiotiques et représentent de grands espoirs contre les bactéries multirésistantes. Nous avons démontré qu'un peptide non-naturel composé de 14 résidus (10 leucines et 4 phénylalanines modifiées avec un éther couronne) est capable de perturber les bicouches lipidiques mais qu'il n'est pas sélectif envers les membranes bactériennes. Afin d'acquérir une spécificité envers les membranes bactériennes, une ou plusieurs résidus leucine ont été substitués par des résidus chargés positivement (lysine et arginine). La sélectivité des peptides envers les membranes bactériennes dépend de la position de substitution des résidus cationiques et nos résultats démontrent que les peptides non-sélectifs adoptent une structure hélicoïdale alors que les peptides sélectifs adoptent une structure en feuillets beta agrégés. Des expériences de RMN à l'état solide ont été réalisées avec des membranes modèles mimant les cellules eucaryotes et les cellules bactériennes afin de mieux caractériser le mode d'action des peptides chargés. Les résultats indiquent que les peptides se positionnent près de l'interface de la bicouche, perturbant la membrane par la formation de pores. La structure et l'orientation des peptides marqués ont également été étudiées dans des bicouches orientées.