104 - Maladies infectieuses et immunitaires

EBI3 participe à la formation de deux cytokines composites, IL-27(EBI3/p28) et IL-35(EBI3/p35). A la différence de l’IL-12, l’IL-27 et l’IL-35 ne sont pas des complexes covalents. Hypothèse: l’administration d’EBI3 pourrait accroitre les quantités d’IL-27 et d’IL-35 en formant des complexes avec les sous-unités p28 et p35 libres. Nous avons observé qu’EBI3 induit la prolifération de la lignée B9 dépendante de l’IL-6 qui n’exprime pas le récepteur à l’IL-27. Cette prolifération est bloquée à la fois par l'anticorps monoclonal α-gp130 et α-IL-6.  De plus,  EBI3 n’a pas d’activité proliférative sur la lignée BA/F3-gp130 qui n’exprime pas le récepteur à l’IL-6.  Ces résultats suggèrent qu’EBI3 à des activités biologiques propres, indépendantes de l’IL-27, possiblement en formant un complexe avec l'IL-6. D'autre part, EBI3 active  les voies  JAK /STAT1 et STAT3 des cellules TCD4+, CD8+, B220+ et de la lignée B9. L’addition de l’α-IL-6 inhibe l’activation des STAT3 mais pas  STAT1. Nous avons confirmé le rôle d'EBI3 indépendamment de l'IL-27 en utilisant des souris IL27RKO. Concernant l’activité biologique, EBI3 induit la différentiation des cellules CD4+ Th1  mais inhibe la production du GMCSF des cellules CD4+Th17. Conclusion: Ces résultats montrent qu’EBI3 pourrait avoir des effets  biologiques indépendants du récepteur à l'IL-27, en conjonction avec l'IL-6. EBI3 pourrait être considéré comme une cible thérapeutique dans les maladies auto-immunes proinflammatoires.   

Le diabète de type 1 (DT1) est une maladie chronique caractérisée par une carence en insuline. DT1 produit des changements morphologiques et histochimiques dans les muscles squelettiques. Le but de cette étude est d'examiner les effets du DT1 sur les muscles squelettiques et la matrice extracellulaire (ME) dans le muscle soléaire (fibres de Type I) et le muscle plantaire (Type II). La ME contient des protéines (MMP) qui sont responsable de la formation, le remodelage et la dégradation de la ME dans les états physiologiques et pathologiques du muscle.

16 jeunes et 16 vieux rats mâles Wistar ont été utilisés dans cette étude. De chaque groupe, 8 rats ont reçu une injection de streptozotocine (65 mg/kg de poids corporel) qui induit le DT1. Le diabète a été confirmé et maintenu pendant 28 jours. Les rats ont été euthanasiés et leurs muscles soléaires et plantaires ont été prélevés. La moitié du muscle a été utilisé pour l'histologie (coloration H&E) et les autres pour les immunoempreintes.

L'expression de la protéine relative de TIMP-2 a augmenté de 556% et 245% pour le soléaire et plantaire, respectivement. La forme active de MMP-2 a augmenté de 301% pour le soléaire et de 146% pour le plantaire. Ces résultats sont significatifs (n=6).

Les résultats sont prometteurs. Il faut continuer les expériences avec les vieux rats pour avoir une meilleure compréhension du rôle de la ME dans la propriété mécanique des muscles car un déséquilibre des MMP peut entraîner une perte de force.

La migration cellulaire via l’expression du récepteur de chimiokines CCR7 est une fonction essentielle du système immunitaire. Une migration excessive des monocytes ainsi qu’une augmentation marquée de l’expression de molécules pro-inflammatoires telles que la prostaglandine E₂ (PGE₂) caractérise l’athérosclérose. Le récepteur «Liver X Receptor a (LXRa), impliqué dans le transport du cholestérol chez les monocytes, est également un acteur important de cette maladie. Dans cette étude, nous explorons l’impact de la PGE₂ et le rôle de l’activation de LXRa sur l’expression de CCR7 chez les monocytes. Pour ce faire, des monocytes provenant de la lignée MonoMac-1 ainsi que de donneurs sains ont été stimulés par T0901317, agoniste de LXRa, en présence ou non de PGE₂. La transcription de l’ARNm de CCR7 a été mesurée par RT-PCR quantitative et l’expression protéique par cytométrie en flux. Finalement, la fonctionnalité des récepteurs CCR7 a été analysée par essais de migration en réponse à CCL19/CCL21. Nos résultats montrent que l’activation de LXRa par son agoniste en présense de PGE₂ augmente la transcription de l’ARNm et l’expression en surface de CCR7 chez les monocytes humains. De plus, l’activation de LXRa en présence de PGE₂ augmente la capacité de migration des monocytes. Une meilleure compréhension de la migration des monocytes permettrait de contrer la formation de plaques dans l’athérosclérose et de mieux comprendre la physiopathologie de cette maladie.

La migration cellulaire via l’expression du récepteur de chimiokine CCR7 tient un rôle clé dans la réponse immunitaire. La prostaglandine E₂ (PGE₂), un important immunomodulateur lipidique, augmente l’expression et la fonctionnalité de CCR7 accentuant ainsi la migration des cellules en réponse à leurs ligands naturels, CCL19/CCL21. Chez les cellules dendritiques, il a été récemment démontré que l’activation des Toll-like Receptors (TLR) augmente la migration via CCR7. Le but de cette étude est de déterminer si l’activation des TLR7/8 en présence de PGE₂ active l’expression et la fonctionnalité de CCR7 chez les monocytes. Expérimentalement, la lignée MonoMac-1 ainsi que des monocytes humains ont été stimulés avec des agonistes des TLR7/8 (R848 et CLO75) en présence ou non de PGE₂. La quantité d’ARNm de CCR7 a été quantifiée par RT-PCR. L’expression en surface du récepteur a été démontrée par cytométrie en flux alors que sa fonctionnalité, déterminée par essais de migration envers CCL19/21. Nos résultats démontrent que, chez les monocytes, l’activation des TLR7/8 augmente la production d’ARNm ainsi que l’expression en surface de CCR7. En présence de PGE₂, ces augmentations sont drastiques (55 fois). Ces résultats sont corroborés avec les essais de migration. Nos travaux sont essentiels à la compréhension des évènements menant à la migration des monocytes vers les organes lymphoïdes permettant ainsi de produire une réponse efficace contre différents pathogènes.

Utilisée dans la médecine traditionnelle indienne, la Withaferin A (WA), dérivée de la planteWithania somnifera, est une lactone stéroïde inhibant l’activation du facteur de transcription NF-κB. Le promoteur du virus de l’immunodéficience humaine de type 1 (VIH-1), le LTR, contient 2 sites de liaison de NF-κB permettant l’expression des gènes du VIH-1.

Vu le rôle central de NF-κB dans l’activation de la transcription du VIH-1 et l’effet inhibiteur de la WA sur l’activation de NF-κB, nous déterminerons si WA réprime la transcription du VIH-1 dans les lymphocytes T.

Afin de déterminer l’impact de la WA sur l’activation du LTR et de NF-κB, une lignée de cellules T, les Jurkat E6.1, a été transfectés avec divers plasmides, pLTR-luc, pNF-κB-luc, pmκB-luc et pκB-tata-luc puis stimulées avec la WA en combinaison avec le PHA/PMA ou le TNF-α. Des gels à retardement ainsi que des immunobuvardages ont ensuite été réalisés.

Nos résultats démontrent que la WA possède un effet inhibiteur sur l’activation du promoteur du VIH-1 dans les cellules T. Cette répression est causée par l’absence d’activation de NF-κB suite au traitement des cellules T par la WA. Des gels à retardement ainsi que des immunobuvardages confirment l’implication de ce facteur de transcription dans la régulation du promoteur du VIH-1.

L’utilisation de la WA en combinaison avec la trithérapie pourrait représenter une voie d’avenir permettant un meilleur contrôle de la réplication du VIH-1 chez les individus infectés.