Optimisation et stabilisation du transporteur aux prostaglandines pour son étude en biologie structurale

Les prostaglandines sont des lipides bioactifs impliqués dans la régulation de plusieurs phénomènes physiologiques et pathophysiologiques tels que la parturition, l'inflammation, et le cancer. Le transporteur aux prostaglandines (PGT) a pour fonction la recapture extracellulaire des prostaglandines pour les mener à leur dégradation intracellulaire. Ainsi, PGT joue un rôle central dans la médiation des effets physiologiques des prostaglandines. De plus, PGT fait partie de la famille des transporteurs organiques anioniques dont les structures et les mécanismes de transport des substrats sont encore très peu connus. Dans notre projet, nous voulons résoudre le mécanisme de transport des prostaglandines par le PGT en déterminant sa structure moléculaire par cristallographie aux rayons x en présence de ses substrats. Pour le moment, la protéine a été surexprimée dans les cellules d'insectes Sf9, purifiée par chromatographie d’affinité par immobilisation métallique, et analysée par chromatographie d’exclusion stérique. Aussi, plusieurs modifications ont été insérées dans la séquence protéique du transporteur permettant une augmentation importante du rendement et de sa stabilité à des valeurs compatibles avec des essais de cristallographie. Notre étude va permettre le développement d'outils moléculaires pour la résolution de la structure à l'échelle atomique du PGT et son étude structure fonction dans le transport des prostaglandines.