Identification d’un site de clivage du facteur de transcription TAF6δ par la Caspase 7 lors de l'apoptose.

TAF6δ est une sous-unité pro-apoptotique inductible du facteur de transcription TFIID de l'ARN polymérase II. Plusieurs stimuli induisent non seulement l'expression de TAF6δ, mais également son clivage dépendant de la caspase en un fragment qui semble conserver une activité pro-apoptotique. Le but de ce travail était d'identifier les caspases responsables et leurs sites cibles dans TAF6δ. L'analyse transcriptomique a révélé que l'expression d'un sous-ensemble de gènes régulés par TAF6δ est modifiée de façon marquée en présence de l'inhibiteur de la caspase Z-VAD, montrant qu’une activité caspase est requise pour que TAF6δ puisse réguler ces gènes. Des expériences in vitro dans lesquelles la TAF6δ recombinante a été incubée avec les Caspases 3, 6 et 7 ont montré que la Caspase 7 est le principal responsable du clivage de la TAF6δ, sur deux sites différents (donnant produits de 50 et 25 kDa). L'analyse de ces fragments par spectrométrie de masse a permis d'identifier le résidu aspartate en position 398 (47 kDa) comme principal site de clivage dans TAF6δ. Ce site a ensuite été validé en introduisant une mutation ponctuelle (D-A) par mutagénèse dirigée. La mutation de l'aspartate 398 a bloqué le clivage de TAF6δ par la Caspase 7 in vitro. Nous concluons que la TAF6δ est principalement clivée par la Caspase 7 à la position 398 et sur un deuxième site encore non identifié. Ces résultats ouvrent la voie à la compréhension de la fonction du clivage de TAF6δ par les Caspases.